9ApoE基因多态性、hs?CRP与冠心病的相关性研究)The correlation of the polymorphism of apolipoprotein E and high sensitivity C?reactive protein for coronary heart disease
HUANG Yue?Bin，HE Yin?Lei.
Institute of Laboratory Medicine, Youjiang Nationalities Medical College, Baise 533000, Guangxi, China
【Abstract】 Objective To analyze the polymorphism of apolipoprotein E (ApoE), and high sensitivity C?reactive protein (hs?CRP) levels and the relevance of coronary heart disease (CHD). Methods Phenol chloroform extraction was used to get the DNA from the isolated blocks blood coagulation. Polymerase chain reaction, Hhal endonuclease digestion were used to test the 94 cases of CHD patients and 100 healthy control group ApoE polymorphism. Hs?CRP level was measured by immune latex transmission turbidity. Results ① ApoE allele frequency: compared with the control group, ε2 allele frequency decreased significantly (P=0.01) in CHD group, ε4 allele frequency increased (P=0.005). ② Serum hs?CRP concentration in CHD group was significantly higher than that of control grooup (P＜0.05), but there was no significant difference between different alleles on hs?CRP. Conclusions The ApoE gene polymorphism and serum hs?CRP are the sensitive and valuable indicators, which can predict the the risk of cardiovascular disease.
【Key words】 Apolipoprotein E; Genetic polymorphism; High sensitivity C?reactive protein; Coronary heart disease
9ApoE基因多态性、hs?CRP与冠心病的相关性研究)冠心病(CHD)是常见的多发病,是心血管系统疾病常见的死亡原因之一。研究认为，载脂蛋白E（ApoE）基因多态性与CHD有一定的相关性〔1～3〕，冠状动脉粥样硬化并不是一种简单的脂质沉积疾病,炎症是其重要特征,因此,CHD是一种炎性疾病。高敏C反应蛋白(hs?CRP)与CHD的关系逐渐被临床广泛关注。本文对94例CHD患者血液进行AopE基因多态性及hs?CRP浓度检测，旨在研究血清hs?CRP、ApoE基因多态性与CHD的相关性。
1 对象与方法
1.1 研究对象 CHD组94例，其中壮族42例，汉族52例，均为右江民族医学院附属医院心内科2007年1月至2007年8月住院CHD患者；男59例，女35例，年龄44～77岁，平均（60±12.7）岁，全部符合1979年世界卫生组织修订的CHD诊断标准。对照组100例，均为同期住院的非CHD患者，并排除心脑血管疾病及肝、肾、内分泌等影响脂质代谢的疾病；男56例，女44例，年龄45～80岁，平均（65±10.8）岁。所有受试者在实验前均知情同意自愿参加本实验。
1.2 方法9ApoE基因多态性、hs?CRP与冠心病的相关性研究)
1.2.1 ApoE基因多态性的检测
1.2.1.1 DNA提取 采空腹静脉血2.5～3.0 ml，EDTA抗凝，用低渗溶血酚?氯仿抽提白细胞核酸DNA，双蒸水溶解后作为模板。
1.2.1.2 聚合酶链反应（PCR）扩增 引物设计参考文献〔4〕：引物序列，上游引物P1为： 5′?AAC AAC TGA CCC CGG TGG CG?3′,下游引物P2为：5′?ATG GCG CTG AGG CCG CGC TC?3′,由深圳匹基公司合成。PCR反应体系包括10×dNTP(各10 mmol/L)1.0 μl,引物P1和P2各0.8 μl，二甲基亚砜5 μl，DNA模板1.0 μl，Tag DNA聚合酶2 U，加双蒸水至40 μl，混匀即可。PCR反应条件：95℃预变性2 min，然后95℃ 60 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s,共35个循环。用20 g/L琼脂糖凝胶电泳确定特异性扩增产物(292 bp片段)。PCR产物的酶切反应:酶切反应体系包括扩增产物10 U,10×Buffer 5 μl,限制性内切酶Hha1 10 U,加双蒸水至总体积40 μl,置于37℃温育3 h。
1.2.1.3 ApoE基因分型 酶切产物经100 g/L聚丙酰胺凝胶电泳,EB染色后紫外线灯下观察,以pBR322DNA/Hae为分子标志物,判断标准参照文献〔5〕方法。
1.2.2 hs?CRP检测 采空腹静脉血1.0 ml，分离血清，采用日立7060生化全自动仪，以乳胶增强免疫透射比浊法检测。
1.3 统计学分析 选用SPSS10.0软件进行t检验。
2 结果9ApoE基因多态性、hs?CRP与冠心病的相关性研究)
2.1 ApoE的基因型和等位基因频率比较及其多肽性与血清hs?CRP含量关系 见表1，表2。与对照组比较，CHD组和ε2等位基因频率明显降低(P＜0.01)，ε4等位基因频率明显升高(P＜0.05)。CHD组hs?CRP明显高于对照组，而各等位基因组间无显著差异。(责任编辑：南粤论文中心)
