BDC2.5 T细胞是一个NOD小鼠来源的胰岛反应性CD4+T细胞克隆，在1型糖尿病的发病和转移性糖尿病实验中起重要的作用〔5〕。IL?17是源于CD4细胞分化而来的TH?17细胞分泌的细胞因子，是重要的局部组织炎症反应的促炎性因子〔1〕，已有的研究表明IL?17与1型糖尿病的早期发病有着密切的关系〔6〕。因此，改造CD4+细胞来源的BDC2.5 T细胞，提高/抑制其IL?17的表达，可为研究IL?17在CD4介导的1型糖尿病发病中的作用提供重要的实验模型。
逆转录病毒载体能够整合入宿主细胞的染色体，稳定介导外来基因的表达，是目前最常用的基因转移工具之一。据研究，载体中的启动子/增强子系统能在一定程度上提高目的基因的表达水平，而U6增强子可高效驱动以逆转录病毒为载体的siRNA基因在多种细胞中表达，为转基因实验广泛采用〔7〕。另外，在IL?17 cDNA两端分别设计了与病毒载体相匹配的Bgl Ⅱ和Sal I 黏性末端，有利于酶切后与载体的匹配连接；同样，在双链的siRNA?IL?17的5′端和3′端也设计了酶切位点Hpa I和Xho I，有利于siRNA?IL?17和U6的连接，在U6的5′端还设计了Xba I，有利于U6和siRNA插入到病毒载体中。再者，通过流式细胞学技术可定量测定包装细胞的病毒转导率，为获得高滴度的逆转录病毒提供了有利的支持(经NIH3T3细胞鉴定，实验所需病毒滴度在5×106～107 CFU/ml之间)。实验结果，siRNA?IL?17组的IL?17表达较IL?17组显著降低，几乎呈现不表达状态，说明了IL?17的特异性小片段siRNA在宿主细胞内表达能够强有力地抑制其目的基因的表达，使宿主细胞保持了IL?17低水平的表达或不表达。
本研究利用T细胞活化、恒温孵育和聚凝胺的正电荷对细胞膜的吸附作用，可把逆转录病毒对原代细胞的转染率提高至15%～20%，使经常的实验细胞转染率也保持在5%左右。同时，采用第一信号途径和共刺激信号途径活化T细胞，更易于逆转录病毒的转染。总之，本实验系统的优势在于：①提高了逆转录病毒对T淋巴细胞转染的效率，②允许重复大量生产实验所需的转基因细胞，③MACS免疫磁珠分离技术较流式细胞术更适于纯化大量目的细胞。
本文采用以Thy1.1为表面标志、携带IL?17或siRNA?IL?17基因的逆转录病毒载体转染BDC/NOD T淋巴细胞，携带IL?17和siRNA?IL?17 基因的逆转录病毒在T淋巴细胞中具有高效转染率，为研究细胞因子在1型糖尿病发病中的作用建立了实验平台，是本实验的一大特色。
【参考文献】(siRNA?IL?17和IL?17基因逆转录病毒载体的构建及其转染致糖尿病性T细胞中IL?17的表达)
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