变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）在耳鼻咽喉科是一种常见病，是由致敏原引起体内变化而引起的鼻黏膜慢性炎症反应性疾病，主要的临床表现有鼻塞、流鼻涕、鼻痒、打喷嚏，以及嗅觉功能障碍等, 近年来随着工业化程度的发展，生态环境的恶化，AR 的患病率在全球有增长的趋势，据国外统计，其发病率为10%～40%。变应性鼻炎已成为全球性健康问题。目前已用于变应性鼻炎造模的实验动物种类繁多，所选动物有豚鼠、大鼠、小鼠及新西兰兔等。本实验使用卵清蛋白诱发C57小鼠建立变应性鼻炎动物模型， 对其症状学、病理生理学进行观察，并对IL-4、IFN-γ水平进行检测，为该病的临床研究提供依据。
　　材料与方法
　　1.材料
　　 (1)实验动物：采用清洁级、8周龄雄性C57BL6系统小鼠，体重在16-20g左右，共24只，购于广东省实验动物中心。在空调动物房饲养，自由饮水，恒温恒湿的环境下，SPF级固体饲料，适应性饲养7天后开始正式实验。24只小鼠随机分为2组：实验组、对照组，每组12只。另有2只体重250-300g的SD大鼠（购于广东省实验动物中心），饲养条件相同，避免接触过敏原，被动皮肤过敏反应 (passivecutaneous anaphylaxis reaction， PCA)备用。
　　(2)主要试剂：致敏原为卵清蛋白(OVA )，购自上海欧韦达仪器科技有限公司（日本和光纯药工业株式会社生产）；佐剂为氢氧化铝(上海化工试剂总厂)。IL-4、IFN-γ的ELISA试剂盒均购置美国R&D公司。
　　2. AR模型的建立：
　　(1)致敏：实验组小鼠用OVA 10ug、AI( OH) 2mg加入生理盐水0.1ml比例制成混悬液，自第0天开始腹腔注射，隔天1次，共7次。对照组用生理盐水代替同法注射。
　　（2）激发：PCA试验成功后，以OVA 1g：生理盐水10ml溶液， 用微量加样器，每侧鼻腔4ul激发，每1d激发1次，连续激发7次。对照组以生理盐水代替卵白蛋白滴鼻。
　　3.观察项目：
　　 （1）症状学观察：从造模第1天开始观察动物行为、状态、体征、摄食、饮水、大小便性状、体温、体质量等，并在每次鼻腔致敏后，观察记录10min内小鼠鼻清涕量、喷嚏及搔鼻次数，采用叠加法计算总分，总分大于5分为模型成功。
　　
　　（2）PCA反应实验：
　　在基础致敏完成后第2天，从各组中随机取4只小鼠，取眼底静脉采血0.3ml，将血液离心，取血清40ul并用生理盐水按1：4，1：16，1：64，1：256的比例进行稀释，取备用的2只SD大鼠，背部毛剃掉，用红色油笔在背部划数个直径为1.5cm的圆圈，间隔2cm，将不同浓度的血清各0.1ml在圆圈内皮下注射，48h后，将伊文斯蓝10mg，OVA2mg溶解于1ml生理盐水中，并注射于大鼠的股静脉里，半小时后处死大鼠，观察背部皮肤，测量蓝斑直径，若注射血清部位出现蓝斑，且直径大于5mm判定为阳性反应。证明有OVA特异性抗体，造模成功。
　　（3）测定细胞因子IL-4、IFN-r：
　　末次激发12h内，腹腔注射水合氯醛麻醉，摘眼球取外周血，并于3000r/min离心收集血清。用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞因子IL-4、IFN-r。具体操作步骤遵照ELISA测定说明书，采用Mod-el550型酶标仪检测和数据采集。
　　（4）病理学观察：
　　采血后，断颈椎处死小鼠，小心取出取小鼠鼻中隔前中部粘膜，用4%多聚甲醛缓冲液固定、5%甲酸脱钙，经脱水包埋、切片、HE染色，高倍镜下观察肥大细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞的浸润情况。
　　4.统计分析
　　采用SPSS 16·0统计软件包， 分析研究实验前后动物症状的变化及各项理化指标，全部数据统计学分析，以P0.01为差异有统计学意义。
　　结果
　　1.症状评分：
　　实验组12只动物在激发后，小鼠频频用前爪抓鼻端两侧，并伴有喷嚏声，清水鼻涕较多，评分都大于5分，造模成功。对照组仅轻度抓鼻，且喷嚏少，无流涕，评分均小于5分，造模未成功。且对照组的抓鼻次数和喷嚏次数在激发后10分钟内显著低于实验组的次数(P<0.01)。
　　2.PCA实验结果通过
　　PCA实验发现，以实验组小鼠血清接种的SD大鼠背部均出现蓝圈，直径在4-7 mm，而对照组仅见红斑或蓝点，基本上无蓝圈反应，说明实验组小鼠血清中IgE效价较高。
　　3.测定细胞因子IL-4、IFN-r：
　　IL-4含量实验组和对照组分别为（18.64±9.5）pg/ml、（8.26±4.50）pg/ml，IFN-r含量实验组和对照组分别为（10.28±8.5）pg/ml、（4.63±6.8）pg/ml，实验组IL-4和IFN-r含量与对照组之间有显著性差异(P<0.01)，显著高于对照组。
　　4.病理学结果
　　模型组鼻黏膜下组织间质水肿，小血管扩张，血管内及组织固有层内可见以嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞浸润。对照组动物鼻黏膜上皮结构完整，排列均匀，黏膜下层未见组织间隙水肿和血管充血，仅见少量炎症细胞浸润。
　　讨论
　　本实验采用腹腔注射和滴鼻激发的方法，可较好地保证模型局限于变应性鼻炎的表现。根据症状评分，PCA反应阳性以及病理学显示以嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞浸润，证明选用C57小鼠可以成功建立变态反应模型，且相对于其他动物，C57小鼠的费用低，可以大大降低实验的费用。
　　末次激发12h内外周血淋巴细胞产生的细胞因子IL-4和INF-γ均高于正常对照组，说明IL-4和INF-γ在AR炎症发生中起重要作用， 符合人类变应性鼻炎的发病过程， 但人类变应性鼻炎INF-γ存在时相性变化，所以本实验仍有不足之处，需进一步改进，但本实验造模方法仍是可行的。
　　参考文献
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