圈6 FGAd／OPG•I-FGF2表达产物的Western blot分析 A：抗人OPG；B：抗人FGF-2；l：重组病毒感染Veto细胞；2：正
一
常Veto细胞
3讨论 Ad载体是目前基因治疗中应用较为广泛的一种病毒载体，具有许多独特的优点：病毒基因不与宿 主细胞基因组整合，安全性较好；感染的宿主细胞范 围广泛，而且可感染非分裂期细胞；插入外源基因容
量大，制备和操作简便；病毒繁殖滴度高且易于纯 化；细胞及动物实验表明，Ad载体很容易将外源基 因直接转移到靶细胞中，并使其在细胞内有效表达 成活性蛋白⋯。以Ad载体为基础研发的重组人 p53腺病毒注射液(今又生)和重组5型腺病毒 (H101)已获准进入临床应用，通过与化疗或放疗联 合，用于鼻咽癌等肿瘤的治疗HJ。
在基因治疗中，联合应用多个具有协同作用的
治疗基因通常可产生较单基因更为理想的效果，利 用IRES构建多基因共表达载体的转移及表达效率 高。IRES序列是来源于某些病毒和细胞mRNA 5’ 端的一段非翻译区，可在上游启动子的控制下和与 之相连的基因共同转录。IRES的RNA三级结构能 通过一些特定内部分子的相互作用精确与40S核糖 体亚单位结合，以不依赖帽的方式启动远端mRNA 翻译，从而在同一转录本上翻译出不同的蛋白”1。 利用IRES代替内部启动子不但可使多基因共表达 载体大大缩小，而且还克服了传统多基因表达载体 中启动子之间的相互抑制现象。
OPG属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成 员11B，以分泌的方式在胞外发挥作用，是RANKL 的天然抑制剂，可竞争性地抑制RANKL与RANK 的结合，抑制前体破骨细胞的增殖、分化及存活，抑 制成熟破骨细胞的骨吸收活性，从而抑制骨吸 收帕J。研究发现，慢性牙周炎患者龈沟液中RANKL
浓度增高，OPG浓度明显下降，牙周炎病人骨吸收病变区黏附的病变肉芽组织中RANKL表达明显高于非牙周炎组织，OPG在非牙周炎组织中表达高于 牙周炎组织"J，提示OPG可促进牙周组织生长。人牙髓细胞在不同浓度bFGF作用下可促进细 胞增殖【8J，大量实验也证明FGF2在成人牙周炎病 损组织中表达阳性率显著高于正常组织，提示FGF2 是牙周病损组织修复的重要细胞因子，可能通过调 节人牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性和合成纤维连接 蛋自的水平，发挥牙周膜细胞在牙周组织的再生中 的作用，同时FGF-2能显著地抑制人牙周膜细胞胶 原酶Ⅱ、Ⅳ的表达，进而促进牙周组织再生一j。
综上所述，本项目从治疗重症牙周病疗效不佳 的原因人手，以重组Ad为载体，利用IRES共表达 的特征，获得可共表达OPG和FGF-2两种基因的双 顺反子复制缺陷型重组Ad，为进一步进行牙周病的 基因治疗实验提供物质基础。
参考文献
[1] Liu X Y．Targeting gene-virotherapy of cancer and its prosperity
[J]．Cell Res，2006，16(11)：879-86．
